黄曲霉菌的检测方法

黄曲霉菌的检测方法

一、黄曲霉菌的特性 1、黄曲霉菌的毒性极强 远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性,其中以B1毒性最大。当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。

当微量持续摄人,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位,是世界上最强致癌物之一。

2、黄曲霉菌具耐热性 一般烹调加工温度不能将其破坏,裂解温度为1535℃。在水中溶解度较低,溶于油及一些有机溶剂,如氯仿和甲醇中,但不溶于乙醚、石油醚及乙烷。

3、食品中所污染的主要是黄曲霉毒素B1,其毒性一般认为有三种临床特征;急性中毒、慢性中毒和致癌性: (1)急性中毒:它是一种剧毒物质,毒性比KCN大300倍,仅次于钚,是目前已知霉菌中毒性最强的。

它的毒害作用,无论对任何动物,主要变化是肝脏,呈急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。脾脏和胰脏也有重度的病变。

(2)慢性中毒:长期摄入小剂量的黄曲霉毒素则造成慢性中毒。其主要变化特征为肝脏出现慢性损伤,如肝实质细胞变性、肝硬化等。

出现动物生长发育迟缓,体重减轻,母畜不孕或产仔少等系列症状 (3)致癌性:黄曲霉菌是目前所知致癌性最强的化学物质 黄曲霉菌致癌特点是: A 致癌范围广,能诱发鱼类、禽类,各种实验动物、家畜及灵长类等多种动物的实验肿瘤; B 致癌强度大,其致癌能力比六氯环己烷大300万倍; C 可诱发多种癌,AFT主要诱发肝癌,还可话互胃癌、肾癌、泪腺癌、直肠癌、乳腺癌,卵巢及小肠等部位的肿瘤,还可出现畸胎。

二、黄曲霉菌的霉菌毒素 产毒菌及其特性 1.黄曲霉菌黄曲霉菌属真菌门、半知菌亚门丛梗孢科曲霉属。本菌为需氧菌,最适温度30～33℃,相对湿度80-90%为最佳条件。

花生、玉米、大米和小麦是其较好的生长基质。 2.寄生曲霉寄生曲霉也是产生AFT的主要菌株,其特性与黄曲霉类似。

我国分布较少。 3.其他青霉、毛霉和根霉等真菌也能产生AFT,但产毒量甚微,其特性与黄曲霉类似。 对食品的污染 黄曲霉菌(AFT)是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。

它们在紫外线照射下能产生荧光,根据荧光颜色不同,将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT已发现20余种。 黄曲霉菌主要污染粮油食品、动植物食品等;如花生、玉米,大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。

其中以花生和玉米污染最严重。家庭自制发酵食品也能检出黄曲霉毒素,尤其是高温高湿地区的粮油及制品种捡出率更高。三、黄曲霉菌的检测方法 1、生物学方法 1)抑菌试验黄曲霉菌有抑制某些微生物生长的作用,故用其抑菌作用来测定黄曲霉菌的存在和含量。

已经发现巨大芽胞杆菌和短芽胞杆菌对AFT最敏感。通过平皿中抑菌圈大小来衡量黄曲霉菌含量。 2 )荧光测定法根据黄曲霉菌在紫外光照射下可发出荧光的原理,将待检菌株接种于培养基中,28-30~C培养48～72小时,产生的毒素便浸入培养基中,在紫外灯光下照射培养基会呈现出特异的荧光。

此法操作简便。对AFT最低检出量为5pg/ml。· 3)大白鼠试验法黄曲霉菌对大白鼠毒性最早出现损害的是肝脏,其受损范围广,而幼鼠最敏感,雄性幼鼠比雌性幼鼠敏感性更高,用100-150g大白鼠作急性中毒试验,一般3-4天死亡。

4)鸡胚试验 5)鸭雏试验鸭雏对黄曲霉菌非常敏感,致死性强,一般用一次剂量后72小时内死亡。 6)斑点试验本法用于检测真菌毒素致突变试验的一种有意义的方法。

主要利用沙门氏菌/微粒体突变性来检测某些样品种AFT的存在与含量。 A先将鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型变种的菌悬液,与一定量肝组织匀浆混合作倾注平板。

B待凝固后,再将一定量被检物(含AFT)加在平板中央待黄曲霉菌往外围琼脂中扩散时,围绕中心点将出现密布的回复突变的菌落。

本法作为一种生物学检验法广泛应用于开发安全、有用的化学物质和检测食品或农产品中黄曲霉菌。 2.免疫学方法 黄曲霉菌是分子量为312～346的二氢呋喃香豆素的衍生物,无免疫原性,不能引起抗体的产生,故必须与大分子化学基团或蛋白质偶联,成为完全抗原,方能引起免疫动物的抗体形成,然后利用血清学方法检测AFT。

由于黄曲霉菌的量一般都较低,因此,检测方法主要是敏感性较高的放射免疫测定法(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。

近几年来,国外已成功制备了测定B1的酶联免疫测定盒及检测乳中Ml含量的RIA检测盒。这两种检测盒都十分方便,而且快速准确。

四、黄曲霉菌的中毒诊断 1. 有进食可疑黄曲霉菌污染食物史。 2. 临床特点①潜伏期较长。②中毒表现:胃部不适、腹胀、厌食、呕吐、肠鸣音亢进、一过性发热及黄疸等。

3. 实验室检查:用酶联免疫吸附法(ELISA)、薄层层析法或高效液相层析法在可疑食物、患者血尿样中检测出黄曲霉毒素。

4.四季均可发生,但常在阴雨连绵的收获季节后多发。 5.儿童更易发生黄曲霉毒素中毒,根据历史资料分析来看,使人中毒的最危险年龄为1～3岁。

6.中毒前驱表现为发烧、腹痛、呕吐、食欲减退等。 7.2～3周后很快发生中毒性肝病表现:肝脏肿大,肝区疼痛,黄疸、脾大。

腹水,下肢浮肿及肝功能异常。 8.可有心脏扩大,肺水肿,甚至痉挛、昏迷等,多数患者在死前可有胃肠道大出血表现。

9.实验动物临床毒性研究表明:给动物喂食含黄曲霉毒素的饲料后,表现为渐进性食欲减退、口渴、便血、生长缓慢、体重减轻、皮肤出血、过度兴奋、黄殖、抽搐、角弓反张等。

病理解剖可见肝脏弥漫性充血、出血利坏死等表现。